Plásmido Doble Nickase (h) Mucin 5B/MUC5B: sc-401077-NIC

MUC5B codifica la mucina 5B, una mucina secretada de alto peso molecular, formadora de gel y fuertemente O‑glicosilada, que polimeriza mediante enlaces disulfuro para formar la barrera de moco en el epitelio de las vías respiratorias y en otros epitelios mucosos. Esta barrera regula el aclaramiento mucociliar, la hidratación y la defensa innata al modular las propiedades viscoelásticas del moco e influir en las interacciones con microbios y partículas. La expresión de MUC5B está controlada por programas de diferenciación epitelial y vías de señalización inflamatoria, incluidas respuestas transcripcionales impulsadas por citocinas y el procesamiento secretor RE–Golgi que sustenta la biosíntesis de mucinas. Los niveles desregulados de MUC5B o las propiedades alteradas del moco se han implicado en enfermedades crónicas de las vías respiratorias y en patología pulmonar fibrótica, lo que la convierte en un objetivo clave para estudiar la homeostasis epitelial y los mecanismos de defensa mucosal.

Mucin 5B/MUC5B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUC5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUC5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUC5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUC5B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.