Mucin 5B/MUC5B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401077

Descripción general

MUC5B codifica la mucina 5B, una mucina secretada de alto peso molecular, formadora de gel, que constituye un componente estructural principal del moco de las vías respiratorias y de la saliva. Mediante una extensa O-glicosilación y polimerización, MUC5B contribuye a la depuración mucociliar, al atrapamiento de patógenos y a la homeostasis de la barrera epitelial, y su expresión está regulada por programas inflamatorios y de diferenciación en epitelios secretores. Las alteraciones en la abundancia de MUC5B o en sus propiedades reológicas se asocian con un transporte de moco desregulado y con el remodelado crónico de la vía aérea, y cambios genéticos y de expresión se han vinculado con la fibrosis pulmonar y con fenotipos de enfermedad pulmonar mucoobstructiva. Como glicoproteína secretada con múltiples posibilidades de lectura, MUC5B se estudia ampliamente en contextos de diferenciación epitelial, procesamiento secretor en RE/Golgi y señalización de defensa innata.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mucin 5B/MUC5B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MUC5B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MUC5B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MUC5B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mucin 5B/MUC5B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MUC5B para la investigación de la señalización de Mucin 5B/MUC5B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MUC5B críticos para la función de Mucin 5B/MUC5B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MUC5B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Mucin 5B/MUC5B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MUC5B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mucin 5B/MUC5B (h) y el plásmido HDR Mucin 5B/MUC5B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MUC5B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MUC5B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.