Mucin 4/MUC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431204

Panoramica

Muc4 codifica la mucina 4 (MUC4), una mucina transmembrana ad alto peso molecolare, fortemente O-glicosilata, che contribuisce alla protezione della superficie epiteliale, all’idratazione e alla lubrificazione. Grazie al suo ampio dominio extracellulare e alla localizzazione sulla superficie cellulare, MUC4 influenza le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, modula le proprietà di barriera e può incidere sulla segnalazione prossimale ai recettori e sulle vie a valle legate a proliferazione, adesione e migrazione. Nei tessuti murini, l’espressione di Muc4 è associata agli epiteli mucosali e ai programmi secretori, integrandosi con i processi di glicosilazione e di traffico di membrana che plasmano il glicocalice. L’espressione disregolata delle mucine e le alterazioni della glicosilazione sono spesso studiate nel contesto dell’infiammazione, del rimodellamento epiteliale e delle modifiche associate ai tumori nell’adesione e nella segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 4/MUC4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Muc4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Muc4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Muc4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mucin 4/MUC4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Muc4 per lo studio della segnalazione di Mucin 4/MUC4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Muc4 critici per la funzione di Mucin 4/MUC4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Muc4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Muc4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mucin 4/MUC4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Mucin 4/MUC4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Muc4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Muc4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.