Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 4/MUC4 (m): sc-431204

Présentation

Muc4 code la mucine 4 (MUC4), une mucine transmembranaire de haut poids moléculaire, fortement O‑glycosylée, qui contribue à la protection, à l’hydratation et à la lubrification des surfaces épithéliales. Grâce à son long domaine extracellulaire et à sa localisation à la surface cellulaire, MUC4 influence les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, module les propriétés de barrière et peut affecter la signalisation à proximité des récepteurs ainsi que des voies en aval liées à la prolifération, à l’adhésion et à la migration. Dans les tissus murins, l’expression de Muc4 est associée aux épithéliums muqueux et à des programmes sécrétoires, en s’intégrant aux processus de glycosylation et de trafic membranaire qui façonnent le glycocalyx. Une expression dérégulée des mucines et une glycosylation altérée sont fréquemment étudiées dans le contexte de l’inflammation, du remodelage épithélial et des modifications associées aux tumeurs touchant l’adhésion et la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mucin 4/MUC4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Muc4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Muc4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Muc4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mucin 4/MUC4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Muc4 pour l'étude de la signalisation de Mucin 4/MUC4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Muc4 essentiels à la fonction de Mucin 4/MUC4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Muc4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mucin 4/MUC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Mucin 4/MUC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Muc4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mucin 4/MUC4 plasmide HDR (m) et le Mucin 4/MUC4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Muc4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Muc4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.