Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 1/MUC1: sc-416876-ACT

MUC1 code la mucine 1, une mucine transmembranaire fortement glycosylée qui contribue à la fonction de barrière épithéliale et à l’organisation de la surface apicale via son domaine extracellulaire, tout en transmettant des signaux par sa queue cytoplasmique. MUC1 participe aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice et s’interface avec des voies qui régulent la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, la transcription dépendante de la β-caténine et les réponses au stress inflammatoire. Des altérations de l’expression, de la localisation ou des glycoformes de MUC1 sont associées à une dérégulation épithéliale et sont fréquemment étudiées dans des contextes impliquant la signalisation oncogénique, l’invasion et la modulation immunitaire. En tant que glycoprotéine ancrée à la membrane, MUC1 est également largement utilisée comme modèle pour étudier la biologie des mucines, les interactions ligand–récepteur dépendantes de la glycosylation et le remodelage du surfaceome.

Mucin 1/MUC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 1/MUC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 1/MUC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 1/MUC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 1/MUC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.