Mts1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422782
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Mts1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Mts1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mts1: sc-100784
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mts1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422782 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **S100a4** kodiert **Mts1**, ein kalziumbindendes Protein der S100-Familie, das über eine kalziumabhängige Regulation des Aktin-Remodelings und der zugehörigen Signalnetzwerke die Zytoskelettdynamik, Zellmotilität und Zell–Matrix-Interaktionen moduliert. Mts1 wird mit Prozessen wie der epithelial–mesenchymalen Transition, der Aktivierung von Fibroblasten und dem Trafficking von Immunzellen in Verbindung gebracht; berichtet wurden zudem Zusammenhänge mit Signalwegen, an denen Rho-GTPase-Signalisierung und Remodelling der extrazellulären Matrix beteiligt sind. Eine veränderte **S100a4/Mts1**-Expression wird häufig als molekularer Readout für invasive und promigratorische Zellzustände verwendet und in Modellen der entzündungsassoziierten Gewebeumgestaltung sowie der Tumorbiologie untersucht. In Mausmodellen wird **S100a4** außerdem eingesetzt, um das Crosstalk zwischen Stroma und Immunsystem sowie linienspezifische Beiträge zur pathologischen Umgestaltung zu analysieren.
Das Mts1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des S100a4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des S100a4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von S100a4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mts1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von S100a4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mts1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf S100a4-Exone abzielen, die für die Mts1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere S100a4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Mts1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Mts1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des S100a4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mts1 HDR-Plasmid (m) und Mts1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von S100a4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten S100a4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.