Plásmido Doble Nickase (m) mTOR: sc-425273-NIC

El gen Mtor de ratón codifica la quinasa de serina/treonina mTOR, un integrador maestro de la disponibilidad de nutrientes, el estado energético, la tensión de oxígeno y la señalización por factores de crecimiento, que coordina el crecimiento celular y el metabolismo. Mediante su ensamblaje en mTORC1 y mTORC2, mTOR regula la síntesis de proteínas, la autofagia, la biosíntesis de lípidos y nucleótidos, la función mitocondrial y la organización del citoesqueleto a través de efectores downstream como S6K, 4E-BP1 y AKT. La actividad de la vía de mTOR influye en la proliferación, la diferenciación y la activación de células inmunitarias, vinculando a Mtor con estudios de programas del desarrollo y la homeostasis tisular. La señalización desregulada de mTOR está ampliamente implicada en la biología del cáncer, fenotipos de enfermedades metabólicas y mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, lo que la convierte en un nodo central para el análisis de vías en modelos murinos.

mTOR El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mtor en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mtor. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mtor. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mtor alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.