Plasmide Double Nickase (h) mTOR: sc-400140-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) mTOR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide mTOR Double Nickase (h) et le plasmide mTOR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MTOR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p-mTOR Antibody (59.Ser 2448): sc-293133
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) mTOR | sc-400140-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) mTOR | sc-400140-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MTOR code la kinase sérine/thréonine mTOR, un intégrateur central des signaux liés aux facteurs de croissance, aux nutriments, à l’énergie et au stress, qui coordonne le métabolisme cellulaire et l’homéostasie. mTOR agit au sein des complexes mTORC1 et mTORC2 pour réguler la synthèse protéique et la croissance cellulaire via S6K et 4E-BP1, l’autophagie via la signalisation ULK1, ainsi que l’organisation du cytosquelette et les signaux de survie via les voies AKT et SGK. Une signalisation mTOR dérégulée est impliquée dans des altérations de la prolifération et la reprogrammation métabolique en oncologie, et contribue à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs ainsi qu’à des dysfonctionnements cardiométaboliques. Comme mTOR se situe au carrefour des voies PI3K–AKT–mTOR et AMPK, la perturbation de MTOR est largement utilisée pour étudier le dialogue entre voies de signalisation, les réponses au stress et le contrôle de la traduction.
mTOR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MTOR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MTOR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MTOR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MTOR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.