Plasmide CRISPR/Cas9 KO MTHFD1L (h): sc-417762

Présentation

MTHFD1L code une enzyme mitochondriale dépendante des folates qui soutient le métabolisme des unités monocarbonées en générant du formiate et d’autres unités à un carbone utilisées pour maintenir les cycles folates cytosoliques. Cette activité relie le catabolisme mitochondrial de la sérine/de la glycine à la biosynthèse des nucléotides, à la capacité de méthylation et à l’équilibre rédox, influençant la réplication de l’ADN et la régulation épigénétique. Une altération de la fonction de MTHFD1L a été associée à un remodelage métabolique et à des phénotypes prolifératifs observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment la reprogrammation de la voie des unités monocarbonées liée au cancer. Par conséquent, MTHFD1L est fréquemment étudié dans le contexte du métabolisme des folates, de la fonction mitochondriale et de la stabilité du génome en situation de stress nutritionnel ou oxydatif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MTHFD1L (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MTHFD1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MTHFD1L, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MTHFD1L à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MTHFD1L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MTHFD1L pour l'étude de la signalisation de MTHFD1L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MTHFD1L essentiels à la fonction de MTHFD1L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MTHFD1L pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MTHFD1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MTHFD1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MTHFD1L. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MTHFD1L plasmide HDR (h) et le MTHFD1L (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MTHFD1L pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MTHFD1L définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.