Plasmide CRISPR/Cas9 KO MTF-2 (h): sc-411609

Présentation

MTF2 (metal response element binding transcription factor 2) code MTF-2, un régulateur de la chromatine associé au groupe Polycomb, qui participe à des programmes de répression transcriptionnelle contrôlant la spécification des lignées et la stabilité de l’état cellulaire. MTF-2 est lié au fonctionnement de PRC2 et au silençage dépendant de la méthylation de H3K27 au niveau de loci développementaux, en influençant l’accessibilité de la chromatine et des réseaux de régulation génique à longue portée. Grâce à ces mécanismes épigénétiques, MTF2 contribue au contrôle de la prolifération, de la différenciation et des réponses transcriptionnelles au stress. Une dérégulation de l’activité de MTF2 a été rapportée dans des études sur la biologie des cancers et des troubles du développement, où un ciblage Polycomb altéré peut perturber les paysages d’expression génique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MTF-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MTF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MTF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MTF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MTF-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MTF2 pour l'étude de la signalisation de MTF-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MTF2 essentiels à la fonction de MTF-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MTF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MTF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MTF-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MTF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MTF-2 plasmide HDR (h) et le MTF-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MTF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MTF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.