MTBP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404307-ACT

Humanes MTBP (MDM2-Bindungsprotein) ist ein nukleärer Faktor, der durch seine Interaktion mit Treslin/TICRR sowie der CDC45–MCM–GINS‑Maschinerie zur Helikaseaktivierung das Zünden von DNA‑Replikationsursprüngen und den Ablauf der S‑Phase koordiniert. Indem MTBP die Replikationsinitiation mit der Checkpoint‑Kontrolle koppelt, trägt es zur Genomstabilität bei und beeinflusst Proliferationsprogramme unter Replikationsstress. Eine veränderte MTBP‑Expression wurde mit einer dysregulierten Zellzykluskontrolle und chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht – Kontexte, die häufig in der Tumorbiologie und bei anderen Erkrankungen mit beeinträchtigter DNA‑Replikationsfidelität untersucht werden. MTBP ist zudem in Signalwege eingebunden, die das Replikationstiming, DNA‑Schadensantworten und transkriptionelle Programme steuern, welche das Zellwachstum prägen.

MTBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MTBP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MTBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MTBP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MTBP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MTBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MTBP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MTBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MTBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MTBP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.