Plasmide CRISPR d'Activation (h) MTA3: sc-402739-ACT

La MTA3 (metastasis-associated protein 3) humaine est un composant central du complexe NuRD de remodelage de la chromatine et de désacétylation des histones, coordonnant le positionnement des nucléosomes et la répression transcriptionnelle au sein de programmes génétiques du développement et de la spécification de lignée. En s’associant aux HDAC et à d’autres sous-unités de NuRD, MTA3 module la différenciation épithéliale, la transcription hormono-dépendante et des états transcriptionnels liés au cycle cellulaire via une régulation épigénétique. Une expression dérégulée de MTA3 ou une activité de NuRD altérée a été associée à une différenciation aberrante, à des profils d’expression génique liés à la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) et à la biologie tumorale dans de multiples contextes tissulaires. En tant que régulateur de la chromatine, MTA3 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la plasticité transcriptionnelle, l’accessibilité de la chromatine et le contrôle, à l’échelle des réseaux, de l’expression génique.

MTA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MTA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MTA3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MTA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MTA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MTA3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MTA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MTA3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MTA3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MTA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.