MT-MMP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401028-NIC

MMP14 codifica la metalloproteinasi della matrice di tipo 1 associata alla membrana (MT‑MMP‑1), un’endopeptidasi transmembrana che promuove il rimodellamento pericellulare della matrice extracellulare scindendo il collagene e altri substrati della matrice e attivando la pro‑MMP2. Localizzando la proteolisi alla superficie cellulare, MT‑MMP‑1 coordina la migrazione invasiva, il turnover delle adesioni focali e la morfogenesi tissutale attraverso segnali mediati dalle integrine e segnali derivati dalla matrice che intersecano vie come il TGF‑β e i programmi di risposta all’ipossia. Un’attività deregolata di MMP14 è stata associata a un rimodellamento stromale alterato, a un aumento della motilità cellulare e a cambiamenti del microambiente angiogenico osservati in contesti fibrotici e maligni. Queste proprietà rendono MMP14 un nodo centrale per lo studio dell’invasione dipendente da proteasi e della segnalazione mediata dalla matrice in modelli cellulari umani.

MT-MMP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MMP14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MMP14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MMP14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MMP14 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.