Plasmide CRISPR d'Activation (m) MT-MMP-1: sc-421671-ACT

Le gène murin **Mmp14** code la métalloprotéinase matricielle de type membranaire 1 (**MT‑MMP‑1**), une collagénase péricellulaire qui remodèle la matrice extracellulaire en clivant les collagènes fibrillaires et en activant la pro‑MMP2, coordonnant ainsi la migration et l’invasion cellulaires, ainsi que la morphogenèse tissulaire. MT‑MMP‑1 s’intègre à la signalisation des intégrines, à la dynamique des adhérences focales et à la biodisponibilité des facteurs de croissance pour réguler les interactions épithélio‑mésenchymateuses, le bourgeonnement angiogénique et la réparation des plaies. Dans les compartiments immunitaires et stromaux, l’activité de **Mmp14** façonne les microenvironnements inflammatoires et la rigidité de la matrice, influençant l’activation des myofibroblastes et le remodelage fibrotique. Une expression ou une activité dérégulée de **Mmp14** a été associée à un renouvellement pathologique de la matrice dans des modèles de progression tumorale, d’arthrite et de fibrose d’organe, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de la protéolyse extracellulaire et de la mécanobiologie.

MT-MMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mmp14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mmp14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mmp14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mmp14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mmp14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.