Plasmide CRISPR/Cas9 KO MSMP (h): sc-418716

Présentation

MSMP (microseminoprotéine, bêta) code une petite protéine sécrétée dont l’expression est enrichie dans l’épithélium prostatique et qui est détectable dans les fluides extracellulaires, ce qui étaye un rôle dans la signalisation paracrine locale au sein de l’appareil reproducteur masculin. Bien que ses interactions précises avec des récepteurs restent imparfaitement définies, MSMP a été associée à la régulation de la différenciation épithéliale, de l’homéostasie sécrétoire et de la communication tumeur–stroma, des processus qui recoupent des programmes transcriptionnels sensibles aux androgènes. Une expression altérée de MSMP a été rapportée dans différents sous-types moléculaires du cancer de la prostate et est fréquemment étudiée en parallèle des voies d’inflammation et de remodelage du microenvironnement qui influencent la progression. Ces caractéristiques font de MSMP un marqueur utile et un nœud fonctionnel pertinent pour explorer la biologie des facteurs sécrétés dans des modèles dérivés de la prostate.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MSMP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MSMP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MSMP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MSMP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MSMP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MSMP pour l'étude de la signalisation de MSMP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MSMP essentiels à la fonction de MSMP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MSMP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MSMP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MSMP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MSMP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MSMP plasmide HDR (h) et le MSMP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MSMP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MSMP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.