mSin3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401638-ACT

O SIN3B humano codifica a mSin3B, um componente central do complexo correpressor transcricional SIN3, que atua como plataforma para recrutar desacetilases de histonas (incluindo HDAC1/2) e reguladores de cromatina associados, moldando estados epigenéticos. Por meio de interações com fatores de transcrição específicos de sequência e proteínas ligantes de cromatina, a mSin3B modula programas gênicos que governam o controle do ciclo celular, a diferenciação, a senescência e a transcrição responsiva ao estresse. A remodelação de cromatina dependente de SIN3B influencia a repressão transcricional e vias de comprometimento de linhagem, ligando sua atividade a mecanismos relevantes para a desregulação transcricional oncogênica e a estados alterados de proliferação celular. Como os complexos Sin3/HDAC integram múltiplas entradas de sinalização, o SIN3B é frequentemente estudado em contextos em que a repressão epigenética e a estabilidade de redes transcricionais estão perturbadas.

mSin3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIN3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mSin3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIN3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIN3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mSin3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIN3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mSin3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mSin3B em células tumorais com expressão de SIN3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.