Plasmide CRISPR d'Activation (h) Msi1: sc-404014-ACT

MSI1 code la protéine Musashi 1 (Msi1), une protéine conservée de liaison à l’ARN qui régule l’expression post‑transcriptionnelle en se liant à des motifs de séquence présents dans des ARNm cibles, afin de moduler leur traduction, leur stabilité et les décisions de destinée cellulaire. Dans les cellules humaines, Msi1 contribue au maintien des cellules souches/progénitrices et influence les programmes de différenciation en modulant les sorties de signalisation de voies telles que Notch et Wnt/β‑caténine, ainsi que des réseaux plus larges de maturation et de traitement de l’ARN qui contrôlent la prolifération et l’engagement de lignée. Une expression aberrante de MSI1 a été associée à une croissance dérégulée et à des états de différenciation altérés dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui en fait un marqueur utile et un point d’entrée mécanistique pour étudier des circuits transcriptionnels et traductionnels de type oncogénique. En tant que protéine liant l’ARN, Msi1 est également pertinente pour l’étude des réponses au stress et des régulations associées aux granules d’ARN, capables de reprogrammer l’expression génique sans modifier la séquence d’ADN.

Msi1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSI1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Msi1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSI1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSI1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Msi1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSI1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Msi1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Msi1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MSI1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.