Plasmide Double Nickase (h) mSHMT: sc-402609-NIC

SHMT2 code la sérine hydroxyméthyltransférase mitochondriale (mSHMT), une enzyme dépendante du PLP qui catalyse la conversion réversible de la sérine en glycine tout en générant du 5,10‑méthylènetétrahydrofolate dans le cycle mitochondrial des unités monocarbonées. Cette activité soutient le métabolisme des unités monocarbonées dépendant des folates, en couplant l’interconversion des acides aminés à la biosynthèse des nucléotides, à l’homéostasie redox et à la fonction mitochondriale. Par son rôle dans le maintien de l’apport en formiate au pool cytosolique de folates, SHMT2 influence la capacité de réplication et de réparation de l’ADN ainsi que les réponses cellulaires au stress métabolique et oxydatif. La dérégulation des voies liées à SHMT2 a été associée à des phénotypes prolifératifs et métaboliques, et elle est étudiée notamment dans le contexte du métabolisme tumoral et des dysfonctions mitochondriales.

mSHMT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SHMT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SHMT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SHMT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SHMT2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.