Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRVI1 (h): sc-411458

Présentation

MRVI1 (site d’intégration du rétrovirus murin 1, homologue) code une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui couple la signalisation de l’oxyde nitrique/cGMP à la régulation du calcium intracellulaire, notamment via son interaction avec ITPR1 et la modulation de la libération de Ca2+ dépendante des récepteurs à l’IP3. Elle participe à la voie PKG et contribue à la relaxation du muscle lisse, à la fonction plaquettaire et, plus largement, au contrôle de la dynamique des signalisations entraînées par le Ca2+. La signalisation dépendante de MRVI1 influence des processus cellulaires tels que la contraction, la sécrétion et l’excitabilité en ajustant l’intégration des seconds messagers au niveau du réticulum endoplasmique. Une dérégulation des voies Ca2+ et cGMP associées à MRVI1 a été impliquée dans des phénotypes cardiovasculaires et hématologiques, et présente un intérêt pour les études mécanistiques des altérations de signalisation observées dans le cancer et d’autres maladies complexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRVI1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MRVI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MRVI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MRVI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRVI1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MRVI1 pour l'étude de la signalisation de MRVI1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MRVI1 essentiels à la fonction de MRVI1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MRVI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRVI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRVI1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MRVI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRVI1 plasmide HDR (h) et le MRVI1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MRVI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MRVI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.