Plasmide Double Nickase (h) MRP5: sc-402443-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MRP5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MRP5 Double Nickase (h) et le plasmide MRP5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ABCC5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRP5 Antibody (E-10): sc-376965
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MRP5 | sc-402443-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MRP5 | sc-402443-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCC5 code pour le transporteur humain de la famille ATP-binding cassette MRP5, une pompe d’efflux de la membrane plasmique qui exporte des anions organiques, notamment les nucléotides cycliques (cGMP et cAMP) ainsi que divers analogues de nucléotides. En régulant les réserves intracellulaires de nucléotides cycliques, MRP5 module la signalisation par seconds messagers, avec des effets en aval sur l’activité des kinases, la régulation des canaux ioniques et des programmes transcriptionnels qui influencent la prolifération cellulaire et les réponses au stress. L’activité d’ABCC5 est liée à la pharmacologie et à la toxicologie via une modification de la prise en charge cellulaire des xénobiotiques et des antimétabolites, et sa dysrégulation a été associée à des phénotypes de résistance multidrogue et à des contextes de signalisation liés au cancer. Ces caractéristiques font d’ABCC5/MRP5 une cible pertinente pour étudier la biologie des transporteurs, l’homéostasie des nucléotides cycliques et les mécanismes de sensibilité aux composés.
MRP5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ABCC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ABCC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ABCC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ABCC5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.