Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP3: sc-401508-ACT

ABCC3 code pour le transporteur humain de la famille ATP-binding cassette MRP3, une pompe d’efflux basolatérale qui exporte une large gamme d’anions organiques, notamment des conjugués glucuronides et sulfates ainsi que des acides biliaires. MRP3 participe à la détoxification hépatique et à la circulation entérohépatique en coordonnant l’élimination des métabolites et en modulant l’exposition intracellulaire aux xénobiotiques, reliant l’activité du transporteur au métabolisme de phase II et aux réponses de stress cellulaire. Son expression est régulée dans des contextes de cholestase et de signalisation inflammatoire, et une activité ABCC3/MRP3 altérée a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une variabilité de la disposition des médicaments et à des dysfonctionnements hépatobiliaires. Ces propriétés font d’ABCC3 une cible utile pour étudier les barrières médiées par les transporteurs, la reprogrammation métabolique et les réponses adaptatives dans les systèmes hépatiques et épithéliaux.

MRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABCC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABCC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABCC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABCC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ABCC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.