Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP2 (m): sc-419711
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MRP2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MRP2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRP2 Antibody (M2III-5): sc-59611
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP2 (m) | sc-419711 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Abcc2 code le transporteur de la famille ABC MRP2 (ABCC2), une pompe d’efflux de la membrane plasmique qui exporte des conjugués au glutathion, au glucuronide et au sulfate de métabolites endogènes et de xénobiotiques. Chez la souris, MRP2 soutient la détoxification cellulaire et l’homéostasie redox en couplant l’hydrolyse de l’ATP au transport d’anions organiques, notamment des conjugués de la bilirubine et d’autres métabolites de phase II. Son activité s’articule avec les voies de clairance hépatiques et rénales et contribue aux fonctions de barrière des épithéliums polarisés grâce à un trafic coordonné et à une localisation canaliculaire/apicale. Les altérations de la fonction d’ABCC2/MRP2 sont fréquemment étudiées dans le contexte de phénotypes cholestatiques, de la biologie liée à l’hyperbilirubinémie et des mécanismes de résistance multidrogue dans des systèmes modèles.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Abcc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Abcc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Abcc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRP2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Abcc2 pour l'étude de la signalisation de MRP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Abcc2 essentiels à la fonction de MRP2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Abcc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MRP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MRP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Abcc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MRP2 plasmide HDR (m) et le MRP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Abcc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Abcc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.