Plasmide CRISPR d'Activation (h) MRP-L18: sc-409905-ACT

MRPL18 code la protéine ribosomique mitochondriale humaine MRP‑L18, un composant de la grande sous-unité du mitoribosome 55S, indispensable à la traduction des sous-unités de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) codées par le génome mitochondrial. En soutenant la synthèse protéique mitochondriale, MRP‑L18 contribue à la biogenèse de la chaîne de transport d’électrons, à la respiration cellulaire, à la production d’ATP, ainsi qu’au maintien en aval de l’homéostasie redox et métabolique. La perturbation des protéines mitoribosomiques est largement associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale, notamment une bioénergétique altérée, une signalisation de stress et des programmes d’expression des gènes mitochondriaux perturbés, observés dans divers contextes pertinents pour les maladies.

MRP-L18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MRPL18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MRP-L18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MRPL18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MRPL18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MRP-L18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MRPL18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MRP-L18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MRP-L18 dans les cellules tumorales présentant une expression de MRPL18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.