Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRGX2 (r): sc-437369

Présentation

MRGX2 (également appelé membre de la famille MRGPRX2) code un récepteur couplé aux protéines G de la famille Mas, impliqué dans la communication neuro-immune et la signalisation dépendante des stimuli. Chez les rongeurs, les récepteurs de type MRGX2 sont associés à des processus impliquant les neurones sensoriels et les mastocytes, et se couplent à des voies en aval qui régulent la mobilisation du calcium intracellulaire, les programmes de dégranulation et la libération de médiateurs inflammatoires. En tant que GPCR, MRGX2 influence des réseaux de transduction des signaux à la surface cellulaire qui recoupent l’inflammation neurogène liée au stress et à la douleur, ce qui le rend pertinent pour des études mécanistiques sur le prurit, la nociception et les réponses pseudo-allergiques. Une activité dérégulée de cette famille de récepteurs a été associée, dans des modèles précliniques, à une réactivité mastocytaire modifiée et à des phénotypes inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRGX2 (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRGX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de MRGX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de MRGX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRGX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le MRGX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRGX2 plasmide HDR (r) et le MRGX2 (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.