Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MRG1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421714-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRG1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MRG1 Double Nickase Plasmid (m) e il MRG1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cited2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRG1 Antibody (JA22): sc-21795
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRG1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MRG1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene Cited2 del topo codifica il co-regolatore trascrizionale MRG1, una proteina interagente con CBP/p300 che modula programmi di espressione genica dipendenti dal contesto durante lo sviluppo e l’adattamento cellulare. MRG1 integra segnali provenienti dall’ipossia e dalle vie dei fattori di crescita antagonizzando la trascrizione dipendente da HIF-1 e modulando gli output trascrizionali collegati a MAPK e responsivi a TGF-β attraverso la disponibilità di coattivatori. Attraverso questi meccanismi, Cited2 influenza le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e le risposte allo stress, e la sua disregolazione è stata associata, nei sistemi modello, a fenotipi congeniti cardiovascolari ed ematopoietici, nonché ad alterati stati trascrizionali infiammatori e oncogenici.
MRG1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cited2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cited2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cited2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cited2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.