Plasmide CRISPR d'Activation (m) MPZL2: sc-420242-ACT

Le gène murin *Mpzl2* code MPZL2, une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines impliquée dans l’adhésion cellule–cellule et l’organisation de la barrière épithéliale. MPZL2 a été associée à des réseaux de signalisation liés aux récepteurs qui influencent la dynamique du cytosquelette, le contrôle de la croissance dépendant du contact et l’architecture tissulaire, avec des effets en aval sur les programmes de prolifération et de différenciation. Dans les systèmes murins, la modulation de l’activité de MPZL2 est utilisée pour explorer les mécanismes de l’homéostasie épithéliale et des réponses au stress, notamment des voies pertinentes pour le remodelage associé à l’inflammation et la transformation néoplasique. La modulation de l’expression de *Mpzl2* offre ainsi un point d’entrée pratique pour étudier in vivo et en culture cellulaire la signalisation dépendante de l’adhésion et la régulation par le microenvironnement.

MPZL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mpzl2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MPZL2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mpzl2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mpzl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MPZL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mpzl2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MPZL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MPZL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mpzl2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.