MPST CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401643

Übersicht

Die humane MPST (3‑Mercaptopyruvat‑Schwefeltransferase) ist eine mitochondriale und zytosolische Schwefeltransferase, die die Umwandlung von 3‑Mercaptopyruvat zu Pyruvat katalysiert, wobei reaktive Schwefelspezies entstehen und sie zum endogenen Stoffwechsel von Schwefelwasserstoff (H2S) und Persulfiden beiträgt. MPST wirkt an der zellulären Redoxhomöostase, der Verwertung schwefelhaltiger Aminosäuren und der Regulation der Protein‑Persulfidierung mit nachgeschalteten Effekten auf die mitochondriale Bioenergetik und stressabhängige Signalwege mit. Eine veränderte MPST‑Aktivität wurde mit einer erhöhten Empfindlichkeit gegenüber oxidativem Stress und metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht; zudem werden Veränderungen der MPST‑Expression oder der Schwefelsignalisierung in Kontexten wie Neurobiologie, kardiovaskulärer Signalübertragung und der Anpassung von Krebszellen untersucht. Als Teil des umfassenderen Transsulfurierungs‑ und reaktiven‑Schwefel‑Netzwerks bietet MPST einen mechanistischen Ansatzpunkt, um thiolabhängige Signalwege und mitochondriale Funktionen zu untersuchen.

Das MPST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MPST-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MPST-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MPST nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MPST-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MPST-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MPST-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MPST-Exone abzielen, die für die MPST-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MPST-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MPST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MPST CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MPST-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MPST HDR-Plasmid (h) und MPST HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MPST-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MPST-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.