Plasmide CRISPR/Cas9 KO MPP3 (m): sc-420007
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MPP3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MPP3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MPP3 Antibody (D-8): sc-377522
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MPP3 (m) | sc-420007 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Mpp3 code la protéine membranaire palmitoylée 3 (MPP3), un membre de la famille MAGUK de protéines d’échafaudage qui organisent des complexes multiprotéiques à la membrane plasmique. MPP3 contribue à la polarité cellulaire et à l’architecture des jonctions en reliant des partenaires transmembranaires à des composants du cytosquelette et de la signalisation via ses domaines PDZ, SH3 et de type guanylate kinase. Dans les tissus de souris, MPP3 est impliquée dans l’organisation épithéliale et dans des processus de trafic vésiculaire/membranaire qui influencent la différenciation et les fonctions de barrière. La dérégulation des échafaudages MAGUK est largement associée à une altération de la signalisation dépendante de l’adhérence et à une désorganisation tissulaire, faisant de Mpp3 une cible utile pour étudier des mécanismes pertinents pour le développement et les modifications de l’architecture cellulaire associées aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MPP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mpp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mpp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mpp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MPP3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mpp3 pour l'étude de la signalisation de MPP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mpp3 essentiels à la fonction de MPP3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mpp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MPP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MPP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mpp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MPP3 plasmide HDR (m) et le MPP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mpp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mpp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.