Plasmide CRISPR d'Activation (h) MPO/Myeloperoxidase: sc-400822-ACT

Le gène humain **MPO** code la myéloperoxydase, une peroxydase contenant un hème fortement exprimée dans les neutrophiles et les monocytes, qui catalyse la conversion du peroxyde d’hydrogène et des halogénures en acides hypohalogeux, dont l’acide hypochloreux. Cette chimie oxydative soutient la défense immunitaire innée, la formation des pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) et la modulation de voies de signalisation sensibles à l’état rédox, influençant l’inflammation et le remodelage tissulaire. L’activité de la MPO s’inscrit à l’interface des voies des espèces réactives de l’oxygène (ROS), de la maturation du phagosome et des interactions hôte–pathogène, et peut également favoriser la modification oxydative des protéines et des lipides. Une expression ou une activité de la MPO dérégulée a été associée à des troubles inflammatoires, à un risque accru de maladie cardiovasculaire et à des phénotypes myéloïdes associés aux tumeurs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques portant sur l’immunométabolisme et le stress oxydant.

MPO/Myeloperoxidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MPO sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MPO/Myeloperoxidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MPO dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MPO, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MPO/Myeloperoxidase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MPO natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MPO/Myeloperoxidase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MPO/Myeloperoxidase dans les cellules tumorales présentant une expression de MPO silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.