Plasmide CRISPR d'Activation (h) MOZ: sc-403564-ACT

Le gène humain KAT6A code la lysine acétyltransférase MOZ, une histone acétyltransférase de la famille MYST qui acétyle H3/H4 et agit comme co-régulateur transcriptionnel au niveau des enhancers et des promoteurs. MOZ s’intègre aux mécanismes de remodelage de la chromatine et à la transcription dépendante de l’ARN polymérase II pour contrôler des programmes de détermination du destin cellulaire, notamment la différenciation hématopoïétique et le maintien des cellules souches/progénitrices. Par ses fonctions de régulation épigénétique, KAT6A influence des voies impliquées dans la prolifération, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression génique spécifique de lignée. Une dérégulation de l’activité de KAT6A/MOZ, incluant des événements de fusion oncogéniques et des altérations d’expression, a été impliquée dans des hémopathies malignes ainsi que dans une instabilité transcriptionnelle/épigénomique plus large, pertinente pour la recherche en biologie du cancer.

MOZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KAT6A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MOZ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KAT6A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KAT6A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MOZ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KAT6A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MOZ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MOZ dans les cellules tumorales présentant une expression de KAT6A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.