Plasmide CRISPR/Cas9 KO Morc3 (h): sc-404099

Présentation

MORC3 (Morc3) code une ATPase nucléaire de la famille MORC, associée à la chromatine, et contribue à la régulation ATP‑dépendante de l’organisation du génome. Elle a été impliquée dans le contrôle transcriptionnel, le maintien des états d’hétérochromatine et les processus de réponse aux dommages de l’ADN, via des interactions avec des complexes protéiques associés à la chromatine. L’activité de MORC3 est liée à la régulation de l’architecture nucléaire et à des programmes géniques induits par le stress, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la stabilité épigénétique et de la signalisation de l’immunité innée. Un dérèglement de la fonction de MORC3 ainsi que la présence d’auto‑anticorps réactifs ont été rapportés dans des contextes auto‑immuns, ce qui soutient l’exploration de son rôle dans des phénotypes cellulaires associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Morc3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MORC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MORC3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MORC3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Morc3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MORC3 pour l'étude de la signalisation de Morc3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MORC3 essentiels à la fonction de Morc3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MORC3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Morc3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Morc3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MORC3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Morc3 plasmide HDR (h) et le Morc3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MORC3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MORC3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.