Plasmide CRISPR d'Activation (h) Morc3: sc-404099-ACT

Le gène humain **MORC3** (microrchidia family CW-type zinc finger 3) code une ATPase nucléaire qui agit comme régulateur de la transcription et de l’organisation du génome, associé à la chromatine. Morc3 participe au contrôle épigénétique via des activités de remodelage de la chromatine dépendantes de l’ATP et des interactions protéine–protéine qui influencent la dynamique de l’hétérochromatine et les réponses de la chromatine liées aux dommages de l’ADN. Il a été impliqué dans la régulation de programmes d’expression génique pertinents pour les réponses au stress cellulaire et l’architecture nucléaire, des processus souvent perturbés dans le cancer et dans des phénotypes liés à l’immunité. Une activité altérée de MORC3 présente donc un intérêt pour des études mécanistiques reliant l’état de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et des réseaux de régulation génique associés aux maladies.

Morc3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MORC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Morc3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MORC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MORC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Morc3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MORC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Morc3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Morc3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MORC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.