Morc3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404099-ACT

Humanes MORC3 (microrchidia family CW-type zinc finger 3) kodiert eine nukleäre ATPase, die als chromatinassoziierter Regulator der Transkription und der Genomorganisation wirkt. Morc3 ist an der epigenetischen Kontrolle beteiligt, unter anderem durch ATP-abhängige Chromatin-Remodeling-Aktivitäten und Protein-Protein-Interaktionen, die die Heterochromatin-Dynamik und chromatinäre Antworten im Zusammenhang mit DNA-Schäden beeinflussen. Es wurde mit der Regulation von Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die für zelluläre Stressantworten und die Kernarchitektur relevant sind – Prozesse, die bei Krebs und immunbezogenen Phänotypen häufig gestört sind. Eine veränderte MORC3-Aktivität ist daher von Interesse für mechanistische Studien, die Chromatinzustand, Transkriptionskontrolle und krankheitsassoziierte genregulatorische Netzwerke miteinander verknüpfen.

Morc3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MORC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Morc3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MORC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MORC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Morc3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MORC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Morc3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Morc3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MORC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.