Plasmide CRISPR d'Activation (m) MOR-1: sc-422067-ACT

Oprm1 code le récepteur μ-opioïde murin MOR-1, un RCPG couplé à Gi/Go qui régule l’excitabilité neuronale et la transmission synaptique en inhibant l’adénylate cyclase, en réduisant la signalisation cAMP/PKA, en modulant les canaux ioniques et en mobilisant les voies MAPK. MOR-1 est largement exprimé dans les circuits de la douleur, de la récompense et du stress, où il intègre les signaux des peptides opioïdes endogènes pour façonner l’analgésie, le renforcement et les comportements affectifs. Dans les tissus immunitaires et périphériques, MOR-1 peut influencer le dialogue neuro-immunitaire et les réponses inflammatoires via une signalisation dépendante des RCPG. Un dérèglement de la signalisation Oprm1/MOR-1, ainsi que la variation génétique, sont fréquemment étudiés dans des contextes tels que la sensibilité à la douleur, la biologie de la tolérance et de la dépendance, les neuroadaptations liées à l’usage de substances et des phénotypes comportementaux associés au stress dans des modèles murins.

MOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Oprm1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Oprm1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Oprm1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MOR-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Oprm1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MOR-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MOR-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Oprm1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.