Plásmido CRISPR de Activación (h) MOG: sc-402717-ACT

La glicoproteína del oligodendrocito de mielina (MOG) es una proteína de superficie de la mielina del SNC, enriquecida en las prolongaciones de los oligodendrocitos y en las láminas más externas de la vaina de mielina, y contribuye a la integridad de la mielina y a las interacciones axón–glía. Como antígeno de membrana altamente accesible en el compartimento de la mielina, MOG se utiliza ampliamente para estudiar el reconocimiento inmunitario de la mielina del SNC y los mecanismos que regulan la desmielinización y la remielinización. Las respuestas inmunitarias alteradas dirigidas contra MOG y los cambios en programas génicos asociados a la mielina son relevantes para enfermedades desmielinizantes inflamatorias y la patología neuroinflamatoria, lo que respalda su uso en estudios de biología de los oligodendrocitos, presentación de antígenos y lesión de la sustancia blanca. La modulación experimental de la expresión de MOG puede ayudar a desentrañar las vías que gobiernan el mantenimiento de la mielina, la activación microglial y la comunicación cruzada neuroinmunitaria.

MOG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MOG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MOG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MOG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MOG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MOG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MOG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MOG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MOG en células tumorales con expresión de MOG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.