Plasmide CRISPR d'Activation (h) Moesin: sc-401065-ACT

Le gène humain **MSN** code la moésine, un membre de la famille **ERM** (ezrine–radixine–moésine) qui relie la F‑actine corticale aux protéines transmembranaires afin d’organiser la structure et les propriétés mécaniques de la membrane. La moésine régule le remodelage du cytosquelette d’actine, la forme cellulaire, l’adhérence et la migration via une activation dépendante de la phosphorylation et sa participation à des voies de signalisation associées aux GTPases Rho et au PI(4,5)P2. En coordonnant la formation des microvillosités, la polarisation des cellules immunitaires et la dynamique de la barrière endothéliale, la moésine influence des processus tels que le trafic cellulaire et l’organisation tissulaire. Une activité ERM et une signalisation du cytosquelette dérégulées sont fréquemment étudiées dans le contexte d’une invasivité altérée, d’un potentiel métastatique accru et de comportements aberrants des cellules immunitaires dans des modèles de maladie.

Moesin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Moesin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Moesin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Moesin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Moesin dans les cellules tumorales présentant une expression de MSN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.