MOB1B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416280-ACT

MOB1B (MOB-Kinase-Aktivator 1B) kodiert einen konservierten Koaktivator der LATS1/2-Kinasen im Hippo-Signalweg und unterstützt Phosphorylierungskaskaden, die die YAP/TAZ-Aktivität, transkriptionelle Programme und die kontaktabhängige Wachstumskontrolle regulieren. Durch die Modulation des Hippo-Signalwegs trägt MOB1B zur Zellzyklusprogression, Apoptose und Aufrechterhaltung der Gewebehomöostase bei. Störungen von Hippo-Komponenten, einschließlich Regulatoren der MOB-Familie, werden mit veränderten Proliferations- und Migrationsphänotypen in Verbindung gebracht, die häufig im Kontext onkogener Signalgebung und epithelialer Integrität untersucht werden. MOB1B ist daher relevant für die Untersuchung von Signalweg-Crosstalk mit MAPK-, PI3K-AKT- und Netzwerken des zytoskelettalen Remodelings, die Zellschicksalsentscheidungen beeinflussen.

MOB1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MOB1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MOB1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MOB1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MOB1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MOB1B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MOB1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MOB1B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MOB1B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MOB1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.