Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mnt (m): sc-421684

Présentation

Mnt (répresseur transcriptionnel du réseau Max) est un facteur à fermeture éclair leucine de type hélice–boucle–hélice basique (bHLH-LZ) qui forme un hétérodimère avec MAX pour se lier aux éléments E-box et réprimer la transcription, contrebalançant l’activation génique induite par MYC. Dans les cellules de souris, Mnt contribue à coordonner la progression du cycle cellulaire, la différenciation, le métabolisme et les réponses au stress en régulant les cibles du réseau MYC/MAX et des complexes corépresseurs associés à la chromatine. En limitant les programmes transcriptionnels prolifératifs et en influençant les voies de biogenèse mitochondriale et des ribosomes, Mnt soutient l’homéostasie cellulaire en présence de signaux mitogènes. Une altération de l’activité de MNT ou un déséquilibre du réseau MYC–MAX–MNT a été associé à une dérégulation du contrôle de la croissance et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des circuits transcriptionnels oncogéniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mnt (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mnt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mnt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mnt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mnt.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mnt pour l'étude de la signalisation de Mnt, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mnt essentiels à la fonction de Mnt
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mnt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mnt plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Mnt plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mnt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mnt plasmide HDR (m) et le Mnt (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mnt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mnt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.