Mnk1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421657-ACT

O gene **Mknk1** de camundongo codifica a **proteína quinase 1 serina/treonina que interage com MAP quinases** (Mnk1), um efetor a jusante das vias de sinalização **ERK** e **p38 MAPK** que conecta sinais extracelulares ao controle da tradução. A Mnk1 fosforila a **eIF4E** e modula a tradução de mRNA dependente de *cap*, influenciando programas ligados à proliferação, respostas ao estresse e expressão gênica regulada por citocinas. Por meio dessas funções, **Mknk1** é comumente estudado em contextos nos quais a tradução dependente de MAPK remodela o estado celular, incluindo sinalização associada à inflamação e ativação de vias oncogênicas. Sua interação com pontos de controle traducionais conduzidos por **mTOR** e **MAPK** faz dele um nó útil para dissecar a remodelação do proteoma dependente de estímulos.

Mnk1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mknk1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mnk1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mknk1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mknk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mnk1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mknk1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mnk1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mnk1 em células tumorais com expressão de Mknk1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.