MMTAG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413147-ACT

O C1orf35 humano codifica a MMTAG2, uma proteína pouco caracterizada, com ligações emergentes à regulação mitocondrial e metabólica com base em anotações e perfis de expressão em tecidos proliferativos. As evidências atuais sugerem que a MMTAG2 pode participar na homeostase mitocondrial e em processos de adaptação ao stress celular que influenciam a produção de energia e o equilíbrio redox. A função mitocondrial alterada e a reprogramação metabólica são características recorrentes na biologia do cancro e em modelos de doenças neurodegenerativas, tornando o C1orf35/MMTAG2 um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos associados à bioenergética. A investigação sobre este gene também apoia o mapeamento de vias em contextos em que a sinalização mitocondrial se cruza com o controlo do ciclo celular e a proteostase.

MMTAG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1orf35 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMTAG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1orf35 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1orf35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMTAG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1orf35 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMTAG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMTAG2 em células tumorais com expressão de C1orf35 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.