Plasmide CRISPR/Cas9 KO MMS19 (h): sc-405964

Présentation

MMS19 code pour MMS19, un facteur conservé impliqué dans le maintien du génome par ses rôles dans l’assemblage cytosolique des clusters fer‑soufre (Fe‑S) et la maturation de protéines nucléaires dépendantes des Fe‑S, impliquées dans la réplication et la réparation de l’ADN. En soutenant l’intégrité fonctionnelle de multiples enzymes du métabolisme de l’ADN, MMS19 contribue à la tolérance au stress réplicatif, à la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et à la stabilité chromosomique globale. Une perturbation de MMS19 est donc pertinente pour les voies qui protègent l’intégrité du génome et peut influencer la sensibilité cellulaire aux agents génotoxiques. Les processus liés à MMS19 lorsqu’ils sont dysrégulés présentent un intérêt pour l’étude de l’accumulation de mutations, du contrôle des checkpoints et des mécanismes à l’origine des phénotypes d’instabilité génomique observés dans des contextes associés à des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MMS19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MMS19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MMS19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MMS19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MMS19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MMS19 pour l'étude de la signalisation de MMS19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MMS19 essentiels à la fonction de MMS19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MMS19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MMS19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MMS19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MMS19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MMS19 plasmide HDR (h) et le MMS19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MMS19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MMS19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.