MMP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400126-NIC

ヒトMMP2はマトリックスメタロプロテアーゼ-2（ゲラチナーゼA）をコードしており、亜鉛依存性エンドペプチダーゼとしてIV型コラーゲンおよびその他の細胞外マトリックス（ECM）基質を分解することで、基底膜のリモデリングや細胞―マトリックス相互作用を調節します。MMP2活性は、ザイモジェン（不活性前駆体）としての分泌、細胞表面での活性化、TIMPsによる阻害によって制御されており、細胞周囲でのプロテオリシスや組織構築の動的変化と結び付いています。ECMのターンオーバーを介して、MMP2は血管新生、創傷修復、炎症、ならびにインテグリンシグナル伝達やプロテアーゼカスケードに依存する細胞移動経路に影響を及ぼします。MMP2の発現または活性の制御破綻は、がんの浸潤・転移、心血管リモデリング、線維化や炎症性疾患でみられる病的なマトリックスリモデリングと関連しており、組織微小環境の制御機構を解明する研究における重要な標的となっています。

MMP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MMP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MMP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MMP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MMP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。