MMP-13 Double Nickase Plasmid (m): sc-421670-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MMP-13 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MMP-13 Double-Nickase-Plasmid (m) und MMP-13 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mmp13 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MMP-13 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421670-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMP-13 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421670-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Matrix-Metalloproteinase-13 (MMP-13), kodiert durch das Mausgen *Mmp13*, ist eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die bevorzugt fibrilläre Kollagene und andere Substrate der extrazellulären Matrix (ECM) spaltet, um den Gewebeumbau zu regulieren. Ihre Expression wird durch inflammatorische Zytokine und Wachstumsfaktor-Signalwege induziert und ist in MAPK/AP-1- und NF-κB-gekoppelte Transkriptionsprogramme eingebunden, die ECM-Umsatz und perizelluläre Proteolyse koordinieren. Die MMP-13-Aktivität trägt zur Dynamik der Knorpel- und Knochenmatrix, zur Kopplung von Osteoklasten und Osteoblasten sowie zu Wundheilungsprozessen bei, indem sie den Kollagenabbau und nachgeschaltete, aus der Matrix abgeleitete Signalcues moduliert. Eine fehlregulierte *Mmp13*-Expression wird häufig im Kontext muskuloskelettaler Degeneration, inflammatorischen Gewebeumbaus und Tumor-Stroma-Interaktionen untersucht, bei denen eine veränderte ECM-Zusammensetzung Zellmigration und Invasion beeinflusst.
MMP-13 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mmp13-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mmp13 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mmp13-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mmp13-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.