Plasmide Double Nickase (h) MMAB: sc-409091-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MMAB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MMAB Double Nickase (h) et le plasmide MMAB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MMAB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MMAB Antibody (G-3): sc-271424
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MMAB | sc-409091-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MMAB | sc-409091-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MMAB code une adénosyltransférase nécessaire au métabolisme intracellulaire de la vitamine B12 (cobalamine), en catalysant la conversion de la cobalamine en adénosylcobalamine, cofacteur essentiel de la méthylmalonyl‑CoA mutase dans le catabolisme mitochondrial du propionate. Par cette voie, MMAB assure un flux efficace du méthylmalonyl‑CoA vers le succinyl‑CoA, reliant la dégradation des acides aminés et des acides gras à chaîne impaire au cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). La perte de fonction de MMAB perturbe le métabolisme mitochondrial dépendant de la cobalamine et est associée à l’acidémie méthylmalonique et à des erreurs innées du métabolisme apparentées, caractérisées par une accumulation de méthylmalonate. MMAB constitue donc un nœud clé pour l’étude de la biogenèse des cofacteurs mitochondriaux, des réponses au stress métabolique et des relations génotype‑phénotype dans les défauts de la voie de la cobalamine.
MMAB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MMAB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MMAB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MMAB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MMAB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.