Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mlx: sc-403499-ACT

MLX code pour Mlx, un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique à fermeture éclair leucine, qui forme des hétérodimères obligatoires avec des partenaires de la famille Mondo tels que MLXIP (MondoA) et MLXIPL (ChREBP), afin de coupler la disponibilité en nutriments à l’expression génique. Ces complexes régulent des programmes du métabolisme des glucides et des lipides, notamment la transcription répondant au glucose et les réseaux de gènes glycolytiques/lipogéniques, reliant la détection des métabolites mitochondriaux et cytosoliques au contrôle transcriptionnel. Via des interactions avec le circuit transcriptionnel plus large MYC/MAX/MLX, Mlx contribue à la coordination de la croissance, de l’homéostasie énergétique et des réponses adaptatives au stress. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à MLX a été impliquée dans des voies pertinentes pour les maladies métaboliques et dans le remodelage métabolique des cellules tumorales, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel du métabolisme et des états prolifératifs.

Mlx Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MLX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mlx Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MLX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MLX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mlx. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MLX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mlx au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mlx dans les cellules tumorales présentant une expression de MLX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.