Plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (h): sc-417753

Présentation

Le facteur 1 de la leucémie myéloïde (MLF1) est un régulateur conservé du devenir des cellules hématopoïétiques, localisé à la fois dans le cytoplasme et dans le noyau, et impliqué dans des interactions protéine–protéine influençant les programmes transcriptionnels et le contrôle du cycle cellulaire. Il a été associé à la différenciation myéloïde et à la signalisation en réponse au stress, avec des rôles rapportés dans la modulation de la susceptibilité à l’apoptose et de la capacité proliférative des cellules engagées dans une lignée. Une expression altérée de MLF1 ou une mauvaise localisation subcellulaire a été associée à la biologie des hémopathies malignes, notamment dans des contextes de transformation leucémique où les points de contrôle de la différenciation et de la croissance sont perturbés. Ainsi, MLF1 constitue un nœud utile pour étudier les voies qui couplent la régulation transcriptionnelle à la prolifération et à la différenciation dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MLF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MLF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MLF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MLF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MLF1 pour l'étude de la signalisation de MLF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MLF1 essentiels à la fonction de MLF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MLF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MLF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MLF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MLF1 plasmide HDR (h) et le MLF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MLF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MLF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.