Plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-6 (h): sc-406250

Présentation

La phosphatase 14 à double spécificité (DUSP14), également connue sous le nom de MKP‑6, est une phosphatase cytoplasmique des MAPK qui déphosphoryle des résidus thréonine et tyrosine afin d’atténuer la signalisation MAPK. Elle module principalement des voies sensibles au stress et aux cytokines, notamment les cascades JNK et p38 MAPK, en façonnant des programmes transcriptionnels en aval qui contrôlent la prolifération, l’apoptose et les réponses inflammatoires. Par son rôle de régulateur de rétrocontrôle négatif de l’activité des MAPK, DUSP14 contribue à ajuster l’amplitude et la durée du signal dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Une expression ou une activité dérégulée de DUSP14 a été associée à des perturbations de l’homéostasie de la signalisation observées en cancérologie et dans des mécanismes de maladies à médiation immune, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études centrées sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUSP14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUSP14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUSP14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MKP-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUSP14 pour l'étude de la signalisation de MKP-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DUSP14 essentiels à la fonction de MKP-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUSP14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MKP-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MKP-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUSP14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MKP-6 plasmide HDR (h) et le MKP-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUSP14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUSP14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.