Plasmide Double Nickase (h) MKP-3: sc-400850-NIC

La phosphatase à double spécificité 6 (DUSP6), également appelée phosphatase des MAP kinases 3 (MKP-3), est une phosphatase cytosolique qui déphosphoryle et inactive préférentiellement ERK1/2, assurant ainsi un contrôle par rétroaction négative de la cascade de signalisation RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK. En limitant les programmes transcriptionnels induits par ERK, MKP-3 contribue à réguler la prolifération et la différenciation cellulaires, ainsi que les réponses à la stimulation par des facteurs de croissance. Des altérations de l’expression ou de l’activité de DUSP6 peuvent perturber l’amplitude et la durée du signal MAPK, reliant ce régulateur à des mécanismes pertinents pour la signalisation oncogénique, les processus de développement et les états cellulaires sensibles au stress. En tant que phosphatase spécifique de voie, DUSP6 est fréquemment utilisée comme marqueur de lecture et comme modulateur dans les études de la dynamique des réseaux MAPK et de la régulation par rétroaction.

MKP-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUSP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUSP6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUSP6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUSP6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.