Plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-3 (h): sc-400850

Présentation

DUSP6 code la phosphatase à double spécificité MKP‑3, une phosphatase cytosolique des MAPK qui déphosphoryle et inactive préférentiellement ERK1/2 (MAPK3/MAPK1), modulant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation RTK–RAS–RAF–MEK–ERK. En assurant un rétrocontrôle négatif sur l’activité d’ERK, MKP‑3 influence les programmes de prolifération, de différenciation et de réponse au stress, et contribue à maintenir l’homéostasie de la signalisation dans des contextes gouvernés par des signaux de facteurs de croissance, notamment les voies FGFR et EGFR. Des altérations de l’expression ou de l’activité de DUSP6 ont été associées à une dérégulation de la signalisation MAPK observée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, dont l’activation de voies oncogéniques, les réponses inflammatoires et des phénotypes du développement. En tant que régulateur clé de la voie, MKP‑3 est couramment étudiée pour son rôle dans le contrôle par rétroaction, l’adaptation de la signalisation et les sorties transcriptionnelles dépendantes d’ERK.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUSP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUSP6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUSP6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MKP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUSP6 pour l'étude de la signalisation de MKP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DUSP6 essentiels à la fonction de MKP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUSP6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MKP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MKP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUSP6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MKP-3 plasmide HDR (h) et le MKP-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUSP6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUSP6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.