Plasmide Double Nickase (m) MKP-1/DUSP1: sc-422507-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MKP-1/DUSP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MKP-1/DUSP1 Double Nickase (m) et le plasmide MKP-1/DUSP1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dusp1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MKP-1/DUSP1 Antibody (E-6): sc-373841
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MKP-1/DUSP1 | sc-422507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) MKP-1/DUSP1 | sc-422507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dusp1 code la phosphatase-1 des kinases activées par les mitogènes (MKP-1/DUSP1), une phosphatase à double spécificité qui déphosphoryle et inactive des MAPK, notamment ERK, JNK et p38. En tant que régulateur immédiat et précoce inductible, MKP-1 exerce un rétrocontrôle négatif des voies de signalisation activées par le stress et les cytokines, modulant des programmes transcriptionnels liés à l’inflammation, l’apoptose et la progression du cycle cellulaire. Dans les cellules murines, Dusp1 est fréquemment étudié dans des voies situées en aval de ligands des TLR, de facteurs de croissance et du stress oxydant, où il limite l’amplitude et la durée d’activation des MAPK. Une activité DUSP1 dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires et à des réponses au stress altérées, pertinentes pour des modèles de dérégulation immunitaire, de maladie métabolique et de biologie des cancers.
MKP-1/DUSP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dusp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dusp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dusp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dusp1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.