Plasmide CRISPR d'Activation (h) MKP-1/DUSP1: sc-400243-ACT

DUSP1 code la phosphatase 1 des protéines kinases activées par les mitogènes (MKP-1), une phosphatase à double spécificité qui déphosphoryle et inactive des MAPK telles que ERK, JNK et p38 afin d’ajuster l’amplitude et la durée du signal. En tant que régulateur de réponse immédiate, induit par le stress, MKP-1 intègre des signaux provenant des cytokines, des facteurs de croissance et du stress oxydant pour influencer la prolifération, l’apoptose, la différenciation et la signalisation de l’immunité innée. En modulant des programmes transcriptionnels dépendants des MAPK, notamment les interactions croisées entre AP-1 et NF-κB, DUSP1 contribue au contrôle par rétroaction des médiateurs inflammatoires et à l’adaptation cellulaire au stress. Une expression dérégulée de DUSP1 a été rapportée dans des contextes d’inflammation chronique, de dysfonction métabolique et de reprogrammation de la signalisation associée au cancer, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique dans des études centrées sur les voies de signalisation.

MKP-1/DUSP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DUSP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MKP-1/DUSP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DUSP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DUSP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MKP-1/DUSP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DUSP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MKP-1/DUSP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MKP-1/DUSP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DUSP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.