Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Mitofilin Double Nickase Plasmid (h): sc-403617-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mitofilin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mitofilin Double-Nickase-Plasmid (h) und Mitofilin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IMMT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mitofilin: sc-390707
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mitofilin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403617-NIC | 20 µg | $410.00 |
IMMT kodiert Mitofilin, ein essentielles Protein der inneren Mitochondrienmembran und eine Kernkomponente des MICOS-Komplexes, der Crista-Junctions organisiert und die Ultrastruktur der Mitochondrien aufrechterhält. Durch die Formgebung der Cristae-Architektur unterstützt Mitofilin die Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, die Diffusion von Metaboliten und den korrekten Zusammenbau von Superkomplexen der Atmungskette und verknüpft IMMT damit mit der bioenergetischen Homöostase und der mitochondrialen Qualitätskontrolle. Die IMMT-abhängige Membranorganisation steht in Wechselwirkung mit der mitochondrialen Dynamik und Stresssignalgebung und beeinflusst Prozesse wie Apoptose und Mitophagie. Eine Fehlregulation der Cristae-Erhaltung und der MICOS-Funktion wird häufig im Kontext mitochondrialer Dysfunktionen untersucht, wie sie bei Neurodegeneration, kardiometabolischem Stress und dem Stoffwechsel von Krebszellen beobachtet werden.
Mitofilin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IMMT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IMMT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IMMT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IMMT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.